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如何用 cy5 標記 3-吲哚丙酸?

2024-10-28 [39]

cy5標記3-吲哚丙酸|CY5-3-Indolepropionic acid

以下是一種可能的用 Cy5 標記 3 - 吲哚丙酸的方法,但具體操作可能需要根據(jù)實際情況進行調(diào)整和優(yōu)化:

一、材料準備

1.3 - 吲哚丙酸。

2.Cy5 熒光染料及相應的活化試劑(如 NHS-Cy5N - 羥基琥珀酰亞胺活化的 Cy5)。

3.適當?shù)木彌_液,如磷酸鹽緩沖液(PBS)。

4.透析袋或脫鹽柱。

5.有機溶劑如二甲基亞砜(DMSO)(用于溶解某些試劑)。


二、操作步驟

1.溶解與活化

3 - 吲哚丙酸溶解在適當?shù)木彌_液或有機溶劑中,得到一定濃度的溶液。

稱取適量的 NHS-Cy5 溶解在 DMSO 等有機溶劑中,確保其全溶解并活化。

2.標記反應

將活化后的 Cy5 溶液緩慢滴加到含有 3 - 吲哚丙酸的溶液中,在適當?shù)臏囟龋ㄈ缡覝鼗?37℃)下攪拌反應一段時間(幾小時到過夜)。反應體系的 pH 通常維持在弱堿性條件有利于反應進行,可根據(jù)試劑說明書進行調(diào)整。

3.純化

反應結(jié)束后,可以使用透析袋在適當?shù)木彌_液中進行透析,以去除未反應的 Cy5 和其他雜質(zhì)。或者使用脫鹽柱進行純化,按照產(chǎn)品說明書進行操作。

4.檢測與鑒定

使用紫外 - 可見分光光度計和熒光光譜儀等儀器對標記后的產(chǎn)物進行檢測,確定 Cy5 標記的效率和產(chǎn)物的純度。

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